Méthodes courantes :
Test de Bradford :
Utilise une technique de liaison des colorants, induisant un changement de couleur en présence de protéines. Convient à une large gamme de types d’échantillons.
Test de Lowry :
Offre une sensibilité élevée, particulièrement utile pour les faibles concentrations de protéines.
Dosage de l'acide bicinchoninique (BCA) :
Réputé pour sa compatibilité avec différents types d’échantillons et sa capacité à travailler avec des agents réducteurs.
Absorption UV à 280 nm :
Fondé sur le principe selon lequel les protéines absorbent la lumière à cette longueur d’onde, il constitue une méthode simple et rapide pour déterminer la concentration en protéines.
Nanodrop :
La spectrophotométrie Nanodrop mesure avec précision les concentrations de protéines et d’acides nucléiques en utilisant des volumes d’échantillon minimes. Cette méthode rapide et efficace fournit des résultats fiables, soutenant la recherche et le développement dans l’industrie biopharmaceutique.
Méthodes électrophorétiques
Les méthodes électrophorétiques jouent un rôle essentiel pour garantir la qualité et la sécurité des produits fabriqués selon les normes BPF. Les techniques courantes incluent SDS-PAGE, IEF et Western Blotting.
Techniques :
SDS-PAGE (électrophorèse sur gel de polyacrylamide et de dodécylsulfate de sodium) :
Sépare les protéines en fonction du poids moléculaire. Indispensable pour évaluer la pureté des protéines, garantir la cohérence du produit et détecter les contaminants.
IEF (focalisation isoélectrique) :
Sépare les protéines en fonction de leur point isoélectrique (pI). Crucial pour caractériser l’hétérogénéité des charges et détecter les modifications post-traductionnelles.
Western Blot :
Étend SDS-PAGE et IEF pour la détection spécifique de protéines cibles dans des mélanges complexes. Confirme la présence de protéines, vérifie l’identité et quantifie la concentration. Indispensable dans la recherche pharmaceutique et le contrôle qualité.
Ces méthodes permettent aux fabricants de surveiller la qualité, la cohérence et la sécurité des produits, garantissant ainsi que les écarts par rapport aux normes établies sont rapidement corrigés.
Électrophorèse capillaire (CE)
L’électrophorèse capillaire (CE) est une technique analytique puissante utilisée dans les secteurs pharmaceutique et biotechnologique. Elle garantit la qualité et la sécurité des produits, notamment des produits biopharmaceutiques, des protéines et des acides nucléiques.
Méthodes :
CE-FDS :
Évalue la pureté et l’identité des protéines. Sépare les protéines en fonction de leur taille et de leur charge, confirmant la présence des protéines cibles et identifiant les contaminants.
CE-IEF :
Détermine le point isoélectrique des protéines, influençant le comportement et la stabilité. Aide au développement et à la caractérisation biopharmaceutiques.
Électrophorèse de zone capillaire :
Analyse les petites molécules et les composés chargés. Fournit une quantification et une identification précises des analytes dans des mélanges complexes, essentielles au contrôle qualité et à la validation des produits.
